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多肽固相合成(SPPS)和長肽合成的混合技術(shù)

多肽固相合成是當(dāng)今最流行的多肽合成方法。C端的第一個氨基酸被耦合在活化的載體(如聚苯乙烯)上。樹脂既可作為c端保護基,同時又可將增長的肽產(chǎn)品從在合成過程中形成的反應(yīng)混合物中快速分離出來。

  • 多肽固相合成(SPPS)
  • 成功案例

我們經(jīng)常有客戶對超長多肽的合成咨詢,比如長度在100到200個氨基酸的長肽的合成,其實200個氨基酸已經(jīng)是屬于蛋白質(zhì)的范疇了。成功合成169個氨基酸的蛋白證明我們的合成技術(shù)在現(xiàn)有的技術(shù)平臺是完全能勝任長肽的合成的,我們的技術(shù)平臺PeptideSyn通常都是合成50個氨基酸以下的多肽,但是通過我們對多肽鏈接技術(shù)的改造和針對長肽的創(chuàng)新,我們現(xiàn)在能成功合成蛋白質(zhì)長度的多肽。

通過化學(xué)合成的辦法獲得長達100到200個氨基酸的蛋白,比其它方法相比要跟快捷和便宜,況且化學(xué)合成的蛋白是按照氨基酸的順序來進行的,不會出現(xiàn)錯誤或者變異的情況?;瘜W(xué)合成還能加入一些別的辦法不能進行的修飾,比如取代常規(guī)氨基酸為D型氨基酸,增加某個位點的磷酸化或者甲基化?;瘜W(xué)合成還不需要額外增加純化蛋白用的標(biāo)簽比如6HIS或者FLAG等。在蛋白表達的方法上,反而是基因合成,質(zhì)粒構(gòu)建,蛋白表達和純化等工作占據(jù)了絕大多數(shù)的時間和成本。因此長肽的化學(xué)合成方法是廣大科研工作值得嘗試的途徑。

固相合成和混合技術(shù)策略

優(yōu)勢
  • 長肽被快速合成:Fmoc/Boc法
  • 生產(chǎn)周期短
  • 工藝自動化和高效性
  • 沒有需分離的中間體
劣勢
?
  • 原料成本高,易造成原料浪費。
  • 雜質(zhì)較復(fù)雜:包括有插入、截斷、刪除、被修改或未被修改的氨基酸。
  • ?

成功案例 1

成功的在四周內(nèi)合成了一個169個氨基酸的多肽 (M.W. 18716.41, 83% purity)。多肽合成的成功率取決于多肽的序列,有時候150個氨基酸的多肽有時候比一個70個氨基酸的多肽更容易合成。通常利用Boc/Bzl進行氨基酸的保護對于長的多肽會比較有幫助,由于多肽產(chǎn)品的切割需要比較強的酸比如TFMSA和HF,所以在去保護的時候有些有活性的中間產(chǎn)物很容易和一些氨基酸進行反應(yīng),我們對原料和酸堿的選擇能很大程度的解決這些問題,因此我們的PeptideSyn技術(shù)平臺對于長肽的合成起到了突破性的作用。

HPLC Results

Peptide synthesis: Long peptide synthesis

Mass Spectrometry Results

Peptide synthesis: Long peptide mass spectrometry result

成功案例 2

某客戶要求合成一高度疏水的含68個氨基酸的多肽(純度為85%),N端進行FITC標(biāo)記。此多肽在4周內(nèi)成功合成。

HPLC Results

Peptide synthesis: FITC modification HPLC result

Mass Spectrometry Results

Peptide synthesis: FITC modification mass spectrometry result

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